影響凝膠色譜圖的重要因素

影響凝膠色譜圖的重要因素
由實驗得到的凝膠色譜圖，再結(jié)合標(biāo)定線進行分子量分布的計算。因而必須保持標(biāo)定色譜柱和測定試樣對實驗條件的一致性，否則將會引起譜圖的位置、形狀、寬度的變化導(dǎo)致計算結(jié)果的誤差。另外實驗條件本身選擇不合適也會影響色譜圖。
　　a ．流速
　　目前，凝膠色譜實驗中，一般直接記錄譜圖的淋出體積（或保留時間）作為計算參數(shù)。流速的變化將直接影響譜圖的淋出體積，1％的流速變化會引起分子量的誤差達8％。因此，要求輸液泵流速穩(wěn)定在1％以內(nèi)。同樣，記錄儀紙速恒定也很重要，需恒定在0.2％以內(nèi)。
　　b ．進樣濃度
　　凝膠色譜圖與進樣濃度有關(guān)，隨著進樣濃度的增加，色譜圖后移，變寬甚至出現(xiàn)多峰。當(dāng)分子量愈大，溶劑愈良好，流速愈大，分布愈寬時，色譜圖的濃度依賴性表現(xiàn)愈明顯。一旦譜圖有了濃度依賴性，其后果是：所計算的分子量偏小，分布變寬、分離效率變差。因此配制高分子溶液時，在檢測器靈敏度允許范圍內(nèi)應(yīng)盡可能低。當(dāng)采用示差檢測器時，濁度計| 色度計| 粘度計| 折射計| 滴定儀| 密度計| 熱流計| 濃度計| 折射儀| 采樣儀| 如高分子與溶劑的折光指數(shù)差很小，必須配制較高濃度才能得到足夠的信號，這時為了消除濃度對峰位的影響，可采用不同濃度進樣，然后，以峰位對濃度作圖，求得外推濃度至零時的峰值。此法只適用于低分子量（M < 5×105），因為在高分子量高濃度時，峰值對濃度作圖為非線性的。
　　在凝膠色譜實驗中還有一個導(dǎo)致譜圖后移的是由大分子降解引起。當(dāng)大分子流經(jīng)色譜柱時由于剪切作用產(chǎn)生降解，它隨流速增加而增加，故是機械降解。影響降解的因素很多，當(dāng)分子量愈大、濃度愈高、溶劑性能愈差、色譜柱填料愈細、降解愈嚴(yán)重。為了消除色譜圖的濃度依賴性，有人曾采用θ溶劑，但從降解的角度來看是非常不利的。因此，對高分子量聚合物需綜合選擇實驗條件，盡可能選低濃度、低流速以確保結(jié)果的可靠。