高效液相色譜儀的進(jìn)樣系統(tǒng)

高效液相色譜儀的進(jìn)樣系統(tǒng)
進(jìn)樣閥是保證色譜分析準(zhǔn)確度的重要部件。　
　　作用：將待分析樣品引入色譜柱 
　　要求：耐高壓、重復(fù)性好、死體積小、保證中心進(jìn)樣、與溶劑接觸部分有很好的耐腐蝕性、進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜柱系統(tǒng)流量波動(dòng)要小、便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化

進(jìn)樣方式：注射器進(jìn)樣、六通閥進(jìn)樣、停留進(jìn)樣

1注射器進(jìn)樣
　　方法：用高壓注射器吸入少量樣品，穿過隔墊后送入色譜柱頭
　　優(yōu)點(diǎn)：較高柱效，價(jià)格便宜，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單
　　缺點(diǎn)：只能在低壓或停留狀態(tài)使用，易漏液且重現(xiàn)性差


2六通閥進(jìn)樣
　　目前，大多數(shù)高效液相色譜儀配置羅達(dá)因（Rheodyne）六通手動(dòng)進(jìn)樣閥。下圖即為羅達(dá)因7125 進(jìn)樣閥，有二個(gè)位置，第1 個(gè)是取樣，第二個(gè)是進(jìn)樣。備有固定體積的進(jìn)樣環(huán)管，根據(jù)需要可以更換不同的固定體積環(huán)管，例如，分析用的進(jìn)樣環(huán)管，體積在0.5～100μl之間。對(duì)于制備用的進(jìn)樣環(huán)管，可由0.1～5μl。

　　進(jìn)樣閥的內(nèi)部通道是很微細(xì)的，所以，樣品液中決不應(yīng)該帶有固體微粒，以免堵塞通道。同理，樣品液的濃度不宜太高，免使其在進(jìn)樣閥內(nèi)結(jié)晶析出。應(yīng)當(dāng)經(jīng)常清潔進(jìn)樣閥的通道，此時(shí)應(yīng)放在“進(jìn)樣”位置，使得沖洗液自＃5 孔流出。至于樣品環(huán)管則無需清潔，因?yàn)榱鲃?dòng)相自動(dòng)地不斷流過清洗。
　　六通閥處于取樣位置時(shí)，載氣經(jīng)1，2兩通道直接進(jìn)入色譜柱，無樣品進(jìn)入色譜儀，氣體樣品經(jīng)通道5流入接在通道3，6上的定量管7中，經(jīng)通道4流出，使定量管充滿樣品。



　　把六通閥從取樣位置旋轉(zhuǎn)60°后到進(jìn)樣位置，流動(dòng)相經(jīng)1，6通道進(jìn)入定量管，把定量管中的樣品經(jīng)3，2兩通道帶到色譜柱中，實(shí)現(xiàn)了定體積進(jìn)樣，定量管的體積可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)解。


3停留進(jìn)樣
　　方法：進(jìn)樣前切斷流動(dòng)相，待柱頂卸壓后，立即注入樣品，再接通流動(dòng)相
　　優(yōu)點(diǎn)：無泄露現(xiàn)象
　　缺點(diǎn)：無法取得精確保留時(shí)間，重復(fù)性差


自動(dòng)進(jìn)樣器：
　　大量的樣品分析必須使用自動(dòng)進(jìn)樣器，例如，藥物的評(píng)價(jià)測(cè)試和藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究等要求分析大批樣品。
下圖為島津LC-6A 高效液相色譜儀配置的SIL-6A 自動(dòng)進(jìn)樣器示意圖，由色譜儀微機(jī)控制其動(dòng)作。



　　對(duì)于小于20μl進(jìn)樣體積（任意可調(diào)）的動(dòng)作步驟如下。
　　a ．采樣針頭插入沖洗孔，由沖洗泵沖洗整個(gè)流路。
　　b ．提升采樣針頭并移至樣品瓶上方（此時(shí)采樣針頭內(nèi)預(yù)留一個(gè)約3μl的空氣間隙），由注射器動(dòng)作吸液。
　　c ．針頭插入樣品瓶，吸走指定體積的樣品液并且多吸7μl。
　　d ．當(dāng)針頭移開樣品瓶時(shí)，再次吸入一段空氣間隙，此時(shí)采樣針頭已經(jīng)抵達(dá)六通閥進(jìn)樣口上方。
　　e ．六通閥反時(shí)針方向切換，指定體積的樣品液進(jìn)入樣品環(huán)管。
　　f ．六通閥順時(shí)針方向切換至原來位置，流動(dòng)相進(jìn)入樣品環(huán)管，隨即把樣品液導(dǎo)入色譜柱。
　　9 ．注射器內(nèi)多余的液體經(jīng)三通閥排走。然后采樣針頭再次插入沖洗孔，沖洗泵沖洗流路。
　　h ．完成上述動(dòng)作后，采樣針頭回到?jīng)_洗孔上方，停住。等待下一次分析指令。
　　大于20μl樣品液的進(jìn)樣，除了更換進(jìn)樣環(huán)管外，還要通過微機(jī)控制鍵盤改換動(dòng)作步驟。高效液相色譜儀配備微機(jī)控制的自動(dòng)進(jìn)樣器和積分儀可連續(xù)地日夜運(yùn)轉(zhuǎn)，處理幾十、乃至幾百個(gè)樣品，大大提高儀器的工效。