薄層色譜法的作用和相關(guān)知識

薄層色譜法的作用和相關(guān)知識
薄層色譜是化學的一種分離和分析方法
⑴定性鑒別 化學上經(jīng)典的定性鑒別,例如經(jīng)典的有機定性分析或經(jīng)典的毒物分析，是利用各種化合物的溶解度不同和所含功能基的不同,用溶劑提取或用試劑處理,把它們分組或分為單一組分,然后作試管反應(yīng)或點滴反應(yīng)(顏色反應(yīng)),或根據(jù)它們衍生物的理化性質(zhì)進行定性鑒別.這種方法的缺點是樣品用量叫大，分離手續(xù)麻煩,分析時間較長(幾小時或幾時個小時),并可能有雜質(zhì)干擾.,現(xiàn)采用合適的展開劑和現(xiàn)色劑在薄層上作為分離和鑒別,根據(jù)樣品中組分的 值和現(xiàn)色情況,同時用標準作對照,一般即能卻證為某一化合物.用薄層色譜法定性,樣品用量小,分離方便，分離時間短(幾分鐘或幾時分鐘),檢出靈敏度高. 例如，再毒物分析中檢驗是否巴比妥安眠藥中毒時,取胃內(nèi)容物或尿樣品，先用鹽酸酸化后,用乙醚提取，乙醚提取液脫水,過濾蒸干，溶于無水乙醇中，點在硅膠版上用氯仿 無水乙醇（36 1）展開，用硫酸汞二苯偶碳酰肼試劑顯色，并用標準品對照，意見出巴比妥，苯巴比妥，戊巴比妥和異巴比妥。鑒別速度快（1小時），這對于搶救中毒患者和及時為醫(yī)生提供治療方案極為重要
（2）藥品的質(zhì)量控制和雜質(zhì)檢查 藥品的純度，通常用熔點，吸光值等物理常數(shù)作為鑒定的指標。但是薄層檢查也是藥品質(zhì)量控制和雜質(zhì)檢查的一種有效方法，有時甚至比一般方法更有效。一些國家的藥典和藥品規(guī)范已經(jīng)采用。方法是把一定量得樣品 溶液(例如，相當于 樣品)電在薄層上，用展開劑展開并顯色，同時用純品作對照,如果樣品只顯示出純品 值一致的一個斑點,則表示含有雜質(zhì).進一步可用薄層作雜質(zhì)的限量檢查.再上例中,如果已經(jīng)知道顯色劑對雜質(zhì)的最小檢出量為 ,在薄層上點樣 后不顯出雜質(zhì)斑點,則雜質(zhì)的量低于 ,或低于 ,也就是樣品的純度不低于 . 例如鎦體藥物的合成和精致工作中，常含結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì),即按上述方法控制其質(zhì)量和雜質(zhì)的限量.
 ⑶化學反應(yīng)進程的控制,反應(yīng)副產(chǎn)物的檢出以及中間體的分析, 在化學反應(yīng)進行到一定時間或反應(yīng)終了時,把反應(yīng)液取出作薄層分析,可以知道還剩下多少原料藥未起作用.方法是把反應(yīng)液或其有機溶劑提取液點在薄層上，同時點原料作參比對照，看薄層上是否出現(xiàn)原料藥斑點.還可以用薄層檢查反應(yīng)副產(chǎn)物.如果化學反應(yīng)分步進行，則每一步反應(yīng)的中間體的質(zhì)量和產(chǎn)率也都可用薄層進行定性和定量. 例如在合成強力霉素的過程中，需要中間地甲烯土霉素氫化物為脫氧土霉素.氫化反應(yīng)是否完全,可用薄層檢查,如果反應(yīng)完全,則反應(yīng)釜中幾乎沒有或只有極少量的甲烯土霉素存在,薄層板上只顯示出一個脫氧土霉素,如果薄層板上有上下二個明顯的斑點,表示反應(yīng)還沒有完全,尚需繼續(xù)還原,直到只顯示出脫氧土霉素的一個斑點為止才能出料.
 (4) 柱色普法分離條件的探索 柱色普法的實驗條件，例如選用什么吸附劑和洗脫劑較好各個組分按什么順序從柱中洗脫出來，每一分洗脫液中是含單一組分或就含幾種沒有分開的組分等，都可以在薄層上進行探索和檢驗。薄層上所有的展開劑雖不完全照搬柱色普法上，但仍有參考價值。

相關(guān)知識
1、怎樣提高點樣效率？ 
   點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。
    實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應(yīng)注意更換樣品時，應(yīng)將毛細管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距離1-2cm底邊距離1.5cm;HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm底邊距1cm.  水份儀| 分析儀| 溶氧計| 電導度計| PH計| 酸堿計| 糖度計| 鹽度計| 酸堿度計| 電導計| 水分測定儀| 濁度計|
2、展開劑的選擇 
   TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1－0.7之間并達到較好的分離，與此對應(yīng)的是流動相要有適當?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大，溶質(zhì)Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。   
3、TLC的通用顯色方法
    理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：
    1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；
    2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用；
    3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；
    4、硫酸溶劑：對絕大多數(shù)有機物有效，但有破壞性。