生物等效性試驗(yàn)分析方法學(xué)評(píng)價(jià)應(yīng)考慮的幾個(gè)方面

生物等效性試驗(yàn)分析方法學(xué)評(píng)價(jià)應(yīng)考慮的幾個(gè)方面
本文主要從準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度方法、專屬性、線性范圍、樣本的穩(wěn)定性、方法相關(guān)性等方面提出了對(duì)生物等效性試驗(yàn)分析方法學(xué)評(píng)價(jià)的一些認(rèn)識(shí)。

    已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)口服制劑的研發(fā)和申請(qǐng)注冊(cè)在目前的申報(bào)品種中占據(jù)的數(shù)量龐大，該類藥物一般需要與已上市同類品種進(jìn)行生物等效性比較試驗(yàn)，作為評(píng)價(jià)該藥物與已上市品種具有同等內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)考量指標(biāo)。體內(nèi)藥物分析方法學(xué)的評(píng)價(jià)對(duì)判斷其生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的可信性是至關(guān)重要的，現(xiàn)就生物等效性試驗(yàn)中的分析方法學(xué)評(píng)價(jià)談一點(diǎn)我們的意見(jiàn)。 測(cè)厚儀| 測(cè)速儀| 轉(zhuǎn)速表| 壓力表| 壓力計(jì)| 真空表| 硬度計(jì)| 探傷儀| 電子稱| 熱像儀|
    體內(nèi)藥物分析方法學(xué)的評(píng)價(jià)應(yīng)主要對(duì)以下指標(biāo)進(jìn)行考察：
    ：評(píng)價(jià)測(cè)定結(jié)果與真值的符合程度，用回收率表示�；厥章士煞譃榻^對(duì)回收率和相對(duì)回收率。對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，采用不同的回收率評(píng)價(jià)指標(biāo)。
    絕對(duì)回收率（又稱提取回收率）考察測(cè)定結(jié)果與“真值”的接近程度，從生物樣本基質(zhì)中回收得到目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的絕對(duì)回收率。應(yīng)選用高、中、低三種濃度分別進(jìn)行考察，絕對(duì)回收率一般要求在50%~80%。
相對(duì)回收率（又稱方法回收率），從生物樣本基質(zhì)中回收得到目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)值除以加入到生物基質(zhì)中已知量的標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的相對(duì)回收率。該評(píng)價(jià)指標(biāo)已扣除了目標(biāo)藥物在樣品的前處理過(guò)程損失而造成的系統(tǒng)誤差。高、中濃度點(diǎn)測(cè)得的相對(duì)回收率應(yīng)在85~115%，低濃度（定量限）應(yīng)在80~120%。
    在血藥濃度監(jiān)測(cè)、生物利用度研究、藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的確定以及藥物的分布等方面的研究，更關(guān)注的是絕對(duì)回收率，而在進(jìn)行生物等效性研究時(shí)更關(guān)注的是相對(duì)回收率指標(biāo)。
    同一均勻樣品多次測(cè)定結(jié)果之間的接近程度。精密度可分為以下幾種表述方式。不同的表述方式具有不同的含義。
日內(nèi)（批內(nèi)）精密度：在同一天、同一批樣品或用同一批試劑、同一條標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得的精密度，考察的是方法的重復(fù)性。
日間（批間）精密度：分析方法在不同時(shí)間測(cè)定結(jié)果的精密度，考察樣品測(cè)定時(shí)儀器的性能、試劑、標(biāo)準(zhǔn)曲線、環(huán)境條件等發(fā)生微小變化而導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的變異。 
中間精密度：考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，如不同的操作人員、不同的儀器等對(duì)精密度的影響程度。
復(fù)現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室之間的方法精密度。
    一般要求精密度（RSD） 應(yīng)小于15％，在LOQ 附近的RSD 應(yīng)小于20％。 
    可檢出藥物的最小量。靈敏度可用以下方式表述：
檢測(cè)限（LOD）：LOD=3N/S或以空白背景響應(yīng)值的3倍作為估計(jì)值
定量限（LOQ）：S/N=10或以空白背景響應(yīng)值的10倍作為估計(jì)值。定量限應(yīng)是標(biāo)準(zhǔn)曲線的下限，應(yīng)能滿足測(cè)定靈敏度的要求，其準(zhǔn)確度應(yīng)在80%~120%，RSD小于20%（n=5）。
最低檢測(cè)濃度：LOQ/進(jìn)樣體積
    上述表達(dá)的靈敏度均為儀器的靈敏度，實(shí)測(cè)樣品的靈敏度還與樣品的取樣量與前處理有關(guān)。
    是考察樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一地測(cè)定分析物的能力。
    1、代謝產(chǎn)物的干擾：可通過(guò)多次給藥后的生物樣本進(jìn)行考察。
    2、內(nèi)源性物質(zhì)的干擾：可通過(guò)對(duì)生物樣品的凈化處理方法來(lái)排除。
    3、其他藥物的干擾：改用具有分離能力或?qū)�屬性�?qiáng)的分析方法。
    如采用色譜法時(shí)，空白試驗(yàn)是最常用的方法，至少應(yīng)采用6個(gè)不同個(gè)體的空白試驗(yàn)樣本進(jìn)行考察，并提供相應(yīng)的色譜圖，以證實(shí)方法的專屬性。
    指一種分析方法的精密度、準(zhǔn)確度都符合要求的試驗(yàn)結(jié)果，而且供試物濃度成線性的變化范圍，一般用標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)描述（注意配制的介質(zhì)）。線性范圍要求覆蓋實(shí)測(cè)濃度，包括LOQ，上限為最高濃度的120%，下限為最低濃度的80%。（至少6個(gè)濃度點(diǎn)）；相關(guān)系數(shù)γ不低于0.99，同時(shí)符合準(zhǔn)確度和精度度要求（偏差小于15%，最低點(diǎn)的偏差小于20%）。評(píng)價(jià)時(shí)還應(yīng)注意標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距與鈄率的關(guān)系：截距過(guò)大，可能是有干擾成分或者是線性范圍設(shè)置過(guò)寬。
        1、短期室溫穩(wěn)定性：要求高、低濃度樣本在4~24 h內(nèi)穩(wěn)定�？疾鞙囟取⒐庹�、空氣、酶解等因素。
    2、長(zhǎng)期低溫條件下的穩(wěn)定性：從第一個(gè)樣本采集至最后一個(gè)樣本的分析為一個(gè)考察時(shí)間周期，貯存溫度一般為-20℃ ，如果需要也可在-70℃貯存。要求高、低濃度至少分別測(cè)定3次，測(cè)得結(jié)果與第一天測(cè)得的相應(yīng)濃度比較應(yīng)保持穩(wěn)定。
    3、凍融試驗(yàn)：取高、低濃度各3份于-20℃貯存24小時(shí)，取出后在室溫自然解凍，取樣測(cè)定，然后再將樣品放回冷凍12~24小時(shí)，如此重復(fù)循環(huán)二次以上，分別比較各次測(cè)定結(jié)果。 
    4、對(duì)照液和內(nèi)標(biāo)液的穩(wěn)定性：室溫考察6小時(shí)穩(wěn)定性，然后冷藏7~14天或恰當(dāng)?shù)闹芷诤筮M(jìn)行測(cè)定，與新配溶液的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。
    對(duì)同一種樣品，用已證明有相當(dāng)專屬性的分析方法與新建立的分析方法同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，比較兩種分析方法測(cè)得結(jié)果的相關(guān)程度。通常用相關(guān)系數(shù)γ 表示，一般要求兩種方法的相關(guān)系數(shù)γ 在0.95以上。
    以上是我們對(duì)生物等效性試驗(yàn)分析方法學(xué)評(píng)價(jià)方面的一些認(rèn)識(shí)，希望對(duì)進(jìn)行此方面工作的人員有所幫助。