薄層色譜法的具體操作步驟
薄層色譜法的操作過程是不連續(xù)的,每個步驟都有各自對應的設備。一般步驟如下:
1. 選擇固定相
一般固定相或載體都是粒度較小,大小均勻的固體。常用的有硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素、離子交換纖維素、聚酰胺、葡聚糖凝化學鍵和固定相等。根據(jù)不同的待分離樣品選擇合適的載體。
2. 制備薄板
3. 點樣
點樣使用點樣器,定性時可用普通毛細管,定量時應該用微量注射器或微量定量毛細管。
4. 展開樣品
根據(jù)薄層板的尺寸及展開方式的不同,可以選用不同規(guī)格及形式的展開室,常用不同尺寸的水平式及直立式兩種玻璃展開室。
5. 斑點定位
展開后的薄層板上被分離的組分一般是不可見的,需要使用適當?shù)姆椒ㄊ拱唿c顯示并可見,通常使用以下幾種方法來完成這一任務:光學檢測法、蒸汽顯色法、試劑顯色法、生物自顯影 和放射自顯影。
6. 定性分析
分離和定位完成后,可以根據(jù)斑點的位置、定位后的顏色等元素對組分進行定性的分析。
7. 定量掃描
用薄層掃描儀對斑點進行掃描,根據(jù)對斑點面積或掃描峰高的分析可以確定組分的含量。