光纖的紫外共振拉曼光譜研究生物系統(tǒng) 摘要
紫外共振拉曼光譜(UVRRS)已經(jīng)出現(xiàn)了涉及生物系統(tǒng)作為診斷技術在其使用的急劇增加。 UVRRS擁有許多優(yōu)勢,包括能夠獲得振動(因此結構)下的考試系統(tǒng)的信息。之前我們已經(jīng)證實了使用光纖(FO)的在交付激發(fā)光收集和由此產(chǎn)生的拉曼信號[1] UVRRS探頭。
FO的探頭提供了傳統(tǒng)的集中UVRRS配電優(yōu)勢,允許在電源樣品,同時保持相同的功率密度的增加[2]。這使得光纖的紫外共振拉曼光譜(FO - UVRRS)的理想適合光敏生物分子的研究。我們將研究一種酶(BphD)屬于元裂解產(chǎn)品(MCP)家族,從我們的工作提出結果。這種酶催化2 - 羥基-6-氧 - 五-2 ,4-dienoic酸的微生物降解途徑(HOPDA)不尋常的碳 - 碳鍵的水解。
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酸堿度計 BphD構成環(huán)境中的多氯聯(lián)苯的生物降解途徑中的一個瓶頸。而MCP水解包含“催化三聯(lián)”和水解酶家族的結構倍,一些研究表明,他們偏離古典水解反應機制的。特別是,最近的研究表明,水解可能,而不是通過寶石二醇中間,而不是典型的共價;赴l(fā)生。更重要的是,烯醇 - 酮互變異構的HOPDA已經(jīng)提出這個有趣的化學轉化作為催化力量源。直接的酶 - 底物中間的光譜觀測是不可能的,因為中間的過渡性質。相反,BphD突變的準備,這將使我們的“陷阱”綁定的酶底物。我們用FO-UVRRS獲得拉曼光譜的酶(E)和酶的底物混合物(ES)。采用差分光譜,我們獲得關鍵的結構信息,涉及襯底。雖然HOPDA烯醇異構體在溶液中的存在,我們表明,HOPDA酮異構體中的酶結合,支持擬議的烯醇 - 酮互變異構機制。