熒光分光光度計的概述和應(yīng)用
概述用于熒光分析的儀器稱為熒光(分光光度)計。熒光計若配有偏振附件,則能進行熒光偏振測量。近代的熒光分光光度計還能進行化學(xué)發(fā)光參數(shù)的測量。熒光分析法的優(yōu)點:靈敏度高,能提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、發(fā)光強度、發(fā)光壽命、量子產(chǎn)率、熒光偏振等許多信息,工作曲線線性范圍寬等。
1熒光偏振及各向異性測量
在偏振光激發(fā)下,熒光體所發(fā)射的熒光在空間不同取向強度不同,即亦是偏振光。由于熒光偏振不僅與熒光體分子形狀,熒光體吸光對偏振激發(fā)的取向,光選擇性以及其它許多外界因素,從而在生化領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。如測定生物分子間的締合反應(yīng)量,膜內(nèi)微粘度,,蛋白質(zhì)的衰變和轉(zhuǎn)動速度的研究。
2時間分辨熒光光譜
時間分辨熒光光譜技術(shù)是基于不同發(fā)光體發(fā)光衰減速度壽命的不同,從而可對光譜重疊但壽命有差異的組分進行分辨和分別測定,用于熒光壽命的測量。
3同步掃描
根據(jù)激發(fā)和發(fā)射單色器在掃描過程中彼此間所保持的關(guān)系,同步掃描技術(shù)可分為固定波長差,固定能量差,和可變角同步掃描三類。
同步掃描技術(shù)具有使光譜簡化,譜帶窄化,提高分辨率,減少光譜重疊提高選擇性,減少散射光影響等諸多優(yōu)點。
4三維光譜
三維熒光光譜技術(shù)能獲得激發(fā)波長和發(fā)射波長同時變化時的熒光強度信息。在石油勘采中可用于油氣顯示和礦源判定;在環(huán)境監(jiān)測和法庭判證中用于類似可疑物的鑒別;臨床中用于癌細胞的輔助診斷和不同細菌的表征和鑒別;用于化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)研究。采用三維技術(shù)進行多組分混合物的定性、定量分析是分析化學(xué)的重點之一。
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